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    1. 談談CAPS在蛋白質轉膜實驗中的應用


      CAPS是,全稱3-(環己胺)-1-丙磺酸,一種有機化學物質,白色結晶粉末,CAS號1135-40-6,是一種生物緩沖劑,常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒。用于酶化學及HPLC分離堿性藥物的緩沖液,在蛋白測序的轉膜過程中應用廣泛。CAPS緩沖液由CAPS、去離子水組成,調PH到11.0,用于纖連蛋白的純化。

      操作要點:
      1、SDS-PAGE電泳:按常規條件進行(CAPS系統:用于>=20KD蛋白;Tris-Tricine系統:用于低分子量蛋白,也可用于高分子量蛋白);
      2、甲醇濃度:CAPS電印跡緩沖液中甲醇濃度范圍是0-20%(甲醇濃度高,用于低分子量蛋白轉??;甲醇濃度低甚至不含甲醇的用于高分子量蛋白的轉??;
      3、PVDF膜處理:取出PVDF膜,用甲醇浸泡數秒鐘,然后放入CAPS電印跡緩沖液中。(注:此后的操作須防止PVDF膜干涸。如果膜變干,須重復本步驟的操作);
      4、凝膠處理:取出電泳凝膠,在CAPS緩沖液中浸泡5-10分鐘。(注:轉移某些強堿性蛋白pI>9.0時,可省略本步驟);
      5、安裝轉印槽子:將濾紙和海綿放入電印跡緩沖液中浸泡一下,然后按海綿、濾紙、PVDF膜、凝膠、濾紙、海綿的次序將電印跡夾層裝好,并放入小型電轉槽中;
      6、轉印條件:在50V恒壓條件下(100-170mA)于室溫下進行電印跡轉移,轉移時間為0.5-2小時。(注:務必排盡凝膠和PVDF膜之間的氣泡。例如對70kD以上的蛋白質須延長轉移時間);
      7、PVDF膜染色前處理:取出PVDF膜并用去離子水略為漂洗,用甲醇浸泡數秒鐘,然后進行染色;
      8、膜染色:考馬斯亮藍染色(將0.1%考馬斯亮藍R-250溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50秒(切勿超過1分鐘),50%甲醇脫色(勤換脫色液),用去離子水充分洗滌,然后晾干即可.

      CAPS緩沖液配制:
      1、10xCAPS(100mmol/L)緩沖液配制,方法如下:CAPS,22.13g;加去離子水到900ml;用2mol/L NaOH(約20ml)將pH值調到11.0,然后定容到1L,貯存于4C。
      2、CAPS電印跡緩沖液(含10%甲醇的1*CAPS)配制,方法如下:10xCAPS 200ml;加入甲醇200ml;加入去離子水1600ml即可。

      其他應用:
      CAPS還是制造焊接材料、空調設備和制造的原料;還用于制造煙火:用作分析試劑、熱交換載體,也用于制藥工業;用于空氣調節、煙火、干電池;也用作助焊劑、干燥劑;針對涂料行業,用于水性異氫酸酯固化劑。湖南匯百侍生物出售各種生物緩沖劑,包括CAPS、TRIS、BICINE、MOPS等,純度高>99%,工藝穩定,歡迎各位詳詢。
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